分别饰演性格不同的两兄弟,弟弟宋卓文是一名性格顽强的特工,多年处于危险之中,生死一线,但他文雅有礼,心地缜密。而宋卓武是直率勇敢的哥哥,曾经因为救了关雪的命而被分配到特务科,开始了和弟弟交换身份的潜伏生活。除了两位水管工兄弟,游戏中的经典角色也在电影中亮相。碧姬公主作为蘑菇王国意志坚定的统治者,在片中对马力欧进行了严酷的作战训练,以帮助后者挖掘自身潜力。喜剧演员杰克·布莱克、塞斯·罗根则为片中的大反派酷霸,以及“搞笑担当”大猩猩咚奇刚配音。值得一提的还有,为游戏中的马力欧和路易吉兄弟配音长达三十余年的查尔斯·马丁内斯,也在片中友情客串。
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